Importancia de la calidad de la muestra en el análisis de macrominerales.

Belén Larrán¹, Inmaculada Orjales², Lucas Rigueira³, Marta López-Alonso⁴, Marta Miranda⁵

1-Departamento de Patología Animal, Facultad de Veterinaria, Universidad de Santiago de Compostela, Campus Terra, Lugo 2-Departamento de Anatomía, Producción Animal y Ciencias Clínicas Veterinarias, Facultad de Veterinaria, Universidad de Santiago de Compostela, Campus Terra, Lugo
3-Departamento de Anatomía, Producción Animal y Ciencias Clínicas Veterinarias, Facultad de Veterinaria, Universidad de Santiago de Compostela, Campus Terra, Lugo. 4-Departamento de Patología Animal, Facultad de Veterinaria, Universidad de Santiago de Compostela, Campus Terra, Lugo.
5-Departamento de Anatomía, Producción Animal y Ciencias Clínicas Veterinarias, Facultad de Veterinaria, Universidad de Santiago de Compostela, Campus Terra, Lugo.

Introducción

La hemólisis es capaz de alterar los resultados de los análisis y es la causa más frecuente de errores preanalíticos en medicina humana. Su prevalencia en medicina veterinaria es desconocida, pero sabemos que es un error frecuente, especialmente en clínica de grandes animales, asociado principalmente a un mal manejo de las muestras. 
En vacuno de leche, el análisis de macrominerales es la analítica más realizada en los laboratorios. Dada la alta prevalencia de hipocalcemia subclínica y otras alteraciones minerales en ganado vacuno de alta producción lechera, resulta esencial conocer si la hemólisis afecta al análisis de macrominerales para garantizar la fiabilidad de los resultados. 
Este estudio evalúa el impacto del grado de hemólisis de las muestras en las concentraciones de calcio (Ca), fósforo (P) y magnesio (Mg) analizadas por dos métodos: bioquímica (BQ) y espectrometría de masas con plasma acoplado inductivamente (ICP-MS).

Material y métodos 

Se obtuvieron muestras de sangre de diez vacas sanas de raza Holstein en su tercera lactación, con examen físico, hemograma y análisis bioquímico dentro de los rangos de referencia. Se prepararon sueros gradualmente hemolizados añadiendo cantidades crecientes de hemolizado, obtenido de la sangre de cada individuo, al suero original, generando siete grados de hemólisis: 0.0%, 0.2%, 0.5%, 1.0%, 2.5%, 5.0% y 10% (n=70). Cada suero fue dividido en dos alícuotas para el análisis de Ca, P y Mg mediante las técnicas de ICP-MS y BQ húmeda (RAL MnChip PointCare).
Para cada método, el efecto de la hemólisis sobre la concentración de los analitos se evaluó utilizando un análisis de varianza ANOVA de una vía y, cuando este fue significativo, una prueba de comparación múltiple de Tukey. Se calculó el porcentaje de variación con respecto a las muestras sin hemólisis (0.0%) como (ValorInicial/ValorFinal)*100.

Resultados 

La hemólisis produjo variaciones estadísticamente significativas (P<0.05) en las concentraciones de Ca (a partir del 2.5% de hemólisis) y de P (a partir del 10% de hemólisis) exclusivamente con la técnica de BQ. Produciendo una disminución progresiva de los niveles de Ca y un aumento de las concentraciones de P. 
En el caso del Ca, la hemólisis produjo que los valores salieran del rango de referencia (8.3-13.2 mg/dL) para vacuno de nuestro laboratorio. Específicamente, se observó en el 30% de las muestras con 2.5% de hemólisis, el 80% con 5.0% de hemólisis y en todas las muestras del grupo con 10% de hemólisis los niveles estaban por debajo del rango inferior. 

Tabla 1. Porcentaje de variación en la concentración de macrominerales con respecto al valor inicial.

 

 

 

 

 

 

Discusión 

La alteración de P puede considerarse de escasa significación clínica, dado que comienza en un alto grado de hemólisis (10%). Sin embargo, la alteración observada en los niveles de Ca es muy significativa clínicamente. Esta comienza en grados más bajos y frecuentes de hemólisis (2.5%), provocando descensos significativos del Ca y dando lugar a una falsa hipocalcemia. Obtener resultados fiables de Ca en vacuno de leche en el posparto es imprescindible. La hipocalcemia subclínica, puede afectar al 50% de las vacas en el postparto y tiene consecuencias graves, al afectar a la salud, producción y reproducción1. Los resultados evidencian que grados bajo-moderados de hemólisis podrían llevar al diagnóstico incorrecto de hipocalcemia subclínica, impactando negativamente en la granja. Estudios previos sobre la influencia de la hemólisis en el análisis del Ca muestran resultados contradictorios, atribuibles a diferencias en la metodología empleada2,3,4,5. Es esencial que los laboratorios conozcan la influencia de la hemólisis en sus técnicas específicas e informen consecuentemente. 
La ICP-MS destaca por ser una técnica muy sensible y específica y, a diferencia de la BQ, no se ve afectada por interferencias químicas o espectrofotométricas. Por ello, las interferencias observadas tienen un origen analítico y no reflejan una auténtica concentración o dilución de macrominerales.
Conclusión 

La hemólisis puede afectar a la medición del Ca cuando se emplean técnicas de BQ, generando descensos significativos a partir de grados bajos de hemólisis (2.5%). Los veterinarios deben tomar medidas preventivas para evitar la hemólisis en las muestras y los laboratorios deben conocer la influencia de esta en sus técnicas para informar adecuadamente.

Bibliografía

1.Goff. (2008). https://doi.org/10.1016/j.tvjl.2007.12.020

2.Janssen, et al. (1991). PMID:2070016.

3.Leary, et al. (1992). https://doi.org/10.1093/clinchem/38.6.904

4.Jacobs, et al. (1992). PMCID:PMC1481322

5.Bach, et al. (2020). https://doi.org/10.3168/jds.2019-17394