Identificación molecular del virus de Influenza D en casos de bovinos con procesos respiratorios.

Alfredo Angel Benito Zuñiga1, Nuria Antón Baltanás2, Jose Luis Arnal Bernal3, Sofia Lázaro Gaspar4, Cristina Baselga Julián5

1-EXOPOL S.L Polígono Rio Gallego D/14, San Mateo de Gallego. Zaragoza 2-EXOPOL S.L Polígono Rio Gallego D/14, San Mateo de Gallego. Zaragoza
3-EXOPOL S.L Polígono Rio Gallego D/14, San Mateo de Gallego. Zaragoza 4-EXOPOL S.L Polígono Rio Gallego D/14, San Mateo de Gallego. Zaragoza
5-EXOPOL S.L Polígono Rio Gallego D/14, San Mateo de Gallego. Zaragoza

Introducción: 

El virus de influenza D (IDV) tiene un genoma RNA segmentado, con una única glicoproteina de envoltura codificada por el gen hemaglutinina-esterasa-fusion (HEF), responsable de su amplio rango de hospedadores que incluyen al bovino y porcino entre otros. El bovino se ha considerado portador asintomático de este virus, pero estudios recientes demuestran la implicación del IDV en el complejo respiratorio bovino (CRB). Los estudios experimentales con IDV indican que ocasiona lesiones en el tracto respiratorio superior y replica en el tracto inferior causando neumonía ligera o moderada. Por otro lado, al igual que el resto de virus de influenza, IDV presenta una gran variabilidad describiéndose hasta el momento cuatro linajes en base a la filogenia del gen HEF. La infección por IDV se describe en bovinos de varios paises en el mundo, incluido varios europeos; sin embargo, su presencia en el ganado bovino español no se ha evaluado hasta el momento. Por estos motivos se realizó un estudio con el fin de identificar IDV en bovinos con procesos respiratorios y realizar la caracterización molecular de las cepas de nuestro país.

Materiales y Métodos: 

El estudio fue realizado sobre un total de 171 casos clínicos de bovino compatibles con enfermedad respiratoria y recibidos en nuestro laboratorio durante el último año. Los casos procedían principalmente de España (n=150) pero también de Rumanía (n=14) y Portugal (n=7). Las muestras evaluadas fueron hisopos respiratorios (21%), lavados bronquioalveolares (31%) pulmón (39%) y otras muestras (9%).  Cada caso fue evaluado con un panel de ensayos qPCR para identificar los principales agentes implicados en el CRB: BRSV, Parainfluenza 3, Herpesvirus bovino 1, Pestivirus, Mycoplasmopsis bovis, Pasteurella multocida, Histophilus somni, Mannheimia haemolytica e Influenza D virus. La caracterización molecular de las cepas circulantes fue realizada mediante secuenciación Sanger del gen HEF siguiendo un protocolo previamente descrito (Yu y col. 2022). El análisis filogenético fue realizado utilizando los programas bioinformáticos MAFFT v07 y el visualizador de dendogramas Archaeopterix; así como secuencias de referencia del gen HEF para los cuatro linajes de IDV depositadas en Genbank.

Resultados y Discusión: 

Los procesos respiratorios causan importantes pérdidas económicas a la industria bovina a nivel global y tienen por lo general una etiología multifactorial en la que estan implicados diferentes agentes virales y bacterianos. En nuestro estudio los principales virus identificados fueron el Coronavirus bovino (32%), BRSV (16%) y la Parainfluenza 3 (22%), por lo general en co-infección con uno o más de los agentes bacterianos evaluados. Por otro lado, IDV fue identificado en el 7% (12/171) de los casos evaluados, en muestras procedentes de seis provicias españolas y dos casos de Rumanía. La identificación de este agente se realizó principalmente en lavados bronquioalveolares (51%), pero también en hisopos (41%) y pulmón (8%). Es interesante resaltar que el 75% (9/12) de los casos positivos a IDV, este agente estuvo en co-infección con otros virus, principalmente BRSV y Coronavirus bovino; sin embargo en los restantes tres casos IDV fue el unico agente viral identificado. La presencia de IDV como único agente viral identificado en animales con enfermedad respiratoria ha sido descrita recientemente en terneros del Reino Unido, Irlanda e Italia; apoyando la hipótesis de que este virus podría tener un rol primario en el desarrollo del CRB.

La caracterización molecular del IDV pudo ser realizada en seis casos positivos de diferentes provincias españolas y un caso procedente de Rumanía. El análisis filogenético de las secuencias de IDV españolas demostró que todas ellas pertenecían al linaje D/OK, con una homología nucleotídica >99% entre ellas; y con mucha similitud a secuencias de IDV descritas recientemente en Irlanda, Italia y Luxemburgo. Por otro lado, la secuencia de Rumanía fue clasificada dentro del linaje D/660 y presentaba una homología nucleotídica <94% con las secuencias españolas. El linaje D/OK ha sido considerado el de mayor circulación en Europa y la primera descripción del linaje D/660 en nuestro entorno fue realizada en Italia en 2018. Es importante mencionar que estudios posteriores en este país han descrito un aumento del linaje D/660 en comparación al D/OK a partir del año 2019, sugiriéndose un cambio en el genotipo circulante en Italia.

A conocimiento de los autores esta es la primera descripción molecular de la presencia de IDV en ganado bovino en España y posiblemente en Rumanía. Por otro lado, considerando la circulación continua de IDV en la ganadería bovina de la región, así como su potencial asociación con el desarrollo del CRB; recomendamos incluir este agente en los paneles de diagnostico para este proceso. Adicionalmente, sugerimos continuar con los estudios de caracterización con el fin de conocer la diversidad real de IDV en nuestro país.

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